亚洲av蜜桃永久无码精品,一区二区三区精华液,被几个人摁住玩弄隐私作文,熟妇人妻中文字幕无码老熟妇

相關文章
您現(xiàn)在的位置:首頁 > 產(chǎn)品展示 > 分子生物學技術服務 > TA克隆 > TA克隆

TA克隆

簡要描述:TA克?。╟lone):無性繁殖——應用酶學的方法,在體外將目的基因與載體DNA結合成具有自我復制能力的DNA分子(重組子),再通過轉化或轉染宿主細胞、篩選出含有目的基因轉化子,進行擴增、提取獲得大量同一DNA,或其表達產(chǎn)物。

  • 產(chǎn)品型號:
  • 廠商性質:生產(chǎn)廠家
  • 更新時間:2024-05-13
  • 訪  問  量:5516

TA克隆實驗原理 

  TA克隆是利用耐熱聚合酶,如Taq聚合酶、Tfl、Tth等具有末端轉移酶活性,而不具有3 一5外切酶的校準活性,即在PCR產(chǎn)物的兩個3 末端加上未配對的單一A凸出尾 ,質粒載體提供線性3末端單一的T凸出尾,使該載體能夠直接與PCR產(chǎn)物高效連接。技術比其它PCR克隆方法有更高的重組效率。

只需4個步驟:①擴增目的PCR產(chǎn)物;②制備T克隆載體;③PCR產(chǎn)物直接克隆至T載體上④轉化并篩選重組子。

 

實驗步驟

(1)擴增后的PCR產(chǎn)物與T載體的連接

取1只無菌Ep管、用微量進樣器按下列順序加入各成分。

10×T4 DNA Ligase Buffer 2.5 ul

PCR產(chǎn)物約0.3 pmol

T載體約0.03pmol

T4 DNA Ligase 1ul

ddH2O 加至 25ul

*1 DNA的摩爾數(shù)應控制在載體DNA摩爾數(shù)的3-10倍。

*2 相同末端的載體與DNA進行連接時,應首先將載體進行去磷酸化處理,以防止其自身環(huán)化。

(2)蓋好蓋子,用手指輕彈Ep管數(shù)次,并于臺式離心機離心2s 以集中溶液。

(3)將反應管放入4℃金屬浴中反應20h。

(4)取出約2ul的DNA連接液進行瓊脂糖凝膠電泳,鑒定連接結果,與未經(jīng)連接的質粒DNA和酶切DNA一同作電泳。

(5)用0.1×TE將連接混合物稀釋至50ul,使用10ul轉化大腸桿菌感受態(tài)細胞。

(6)通過Amp抗性來篩選轉化子,轉化子擴增后,可將轉化的質粒提取出,進行電泳、酶切等進一步鑒定。

 

 

留言框

  • 產(chǎn)品:

  • 您的單位:

  • 您的姓名:

  • 聯(lián)系電話:

  • 常用郵箱:

  • 省份:

  • 詳細地址:

  • 補充說明:

  • 驗證碼:

    請輸入計算結果(填寫阿拉伯數(shù)字),如:三加四=7
国产人与zoxxxx另类| 精品一区二区三区在线视频| 无遮挡18禁啪啪羞羞漫画 | AV电影在线观看| 亚洲国产精品va在线看黑人 | 99久久无码一区人妻| 成人亚洲性情网站www在线观看| 亚洲色欲一区二区三区在线观看| 亚洲熟妇丰满xxxxx国语| 15学生初次破初视频免费| 浴室高潮bd在线观看| 国产美女在线精品免费观看| 香港三日本8a三级少妇三级99| 婷婷五月综合缴情在线视频| 国产亚洲色婷婷久久99精品| 韩国电影办公室3免费完整版| 少妇与大狼拘作爱| 第一次进入女朋友的身体注意事项| 日本簧片在线观看| 人妻丰满熟妇av无码区app| 国产99久一区二区三区a片| 精品国产亚洲第一区二区三区 | 日本少妇裸体做爰高潮片| 亚洲色丰满少妇高潮18p| 无遮挡啪啪摇乳动态图GIF| 老熟妇仑乱一区二区视頻| 岳故意装睡让我进去| 猛烈顶弄禁欲教官h| 一个人看www在线视频| 日本又黄又爽gif动态图| 亚洲精品无码永久在线观看男男| 中文字幕av伊人av无码av| 亚洲精品无码久久久久sm| 我和虎狼之年的岳135章| 小荡货奶真大水多好紧视频| 久久久精品中文字幕麻豆发布 | 狠狠cao日日穞夜夜穞| 两个人看的www视频免费完整版| 我要受不了了快添我的奶头| 亚洲av不卡无码国产| 国产午夜精品久久久久免费视|